內(nèi)參抗體怎么選
供稿：技術(shù)部
發(fā)布時間：2022-05-11
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內(nèi)參抗體可用于評價蛋白質(zhì)免疫印跡法(Western Blot)的效率，比較凝膠中每孔的蛋白上樣量。此類對照可幫助確定樣品間表達水平的差異，以判斷是由細胞裂解物的實際蛋白水平導(dǎo)致，還是由上樣量的差異導(dǎo)致。
內(nèi)參抗體主要功能
（1）檢測整個WB流程是否正常
（2）檢測基因表達產(chǎn)物是否正確
（3）比較產(chǎn)物微量的相對變化
（4）評價各個上樣孔內(nèi)蛋白的總量是否基本一致
圖一示例
內(nèi)參抗體在目標(biāo)蛋白的免疫熒光研究中，也可以作為共染的陽性對照。內(nèi)參抗體分為未標(biāo)記型和標(biāo)記型，標(biāo)記物包括生物素、HRP、FITC、PE、Cy染料和Alexa Fluor染料。
內(nèi)參抗體種類很多，比如β-actin、β-tubunlin、GAPDH、Vinculin、LaminB、PCNA等，對不同樣本選擇不一樣的內(nèi)參抗體也是WB實驗成功的關(guān)鍵。本文將簡單介紹選擇內(nèi)參抗體應(yīng)遵循的五項原則：
一、樣本種屬來源：
首先要考慮實驗樣本來源于什么物種。
1. 哺乳動物的組織或者細胞樣本，通常選擇β-actin、β-tubulin、GAPDH、Lamin B、Histone H3、Na,Katpase等。
2. 植物來源實驗樣本，則可以選擇plantactin、Rubisco等。
3. 其他來源樣本研究較少，所以就應(yīng)該參照期刊文獻數(shù)據(jù)，選擇合適的蛋白作為內(nèi)參。
二、分子量大?。?/strong>
選擇內(nèi)參抗體時，應(yīng)該考慮目的蛋白分子量的大小，一般保證目的蛋白與內(nèi)參蛋白分子量相差5KD以上。例如，目的蛋白分子量為40KD，此時不適宜選擇β-actin、與GAPDH作為內(nèi)參，可以考慮選擇α-Tubulin或者β-tubulin作為內(nèi)參。
三、表達水平：
選擇的內(nèi)參蛋白需要在待測樣本中是高表達的。常用的內(nèi)參蛋白是由管家基因高表達的，是細胞發(fā)育和維持細胞活力所必須的。例如，細胞核的內(nèi)參蛋白 PCNA，在 DNA S 期表達，因此對于非增殖細胞不推薦使用。
四、目的蛋白表達定位：
五、ELK Biotechnology可選相關(guān)內(nèi)參：
| 適用范圍 | 名稱 | 貨號 | 分子量 |
| 胞質(zhì) | β-Tubulin | EM1114 | 50kDa |
| β-Actin | EM1031 | 43kDa | |
| α-Tubulin | EM1115 | 52kDa | |
| GAPDH | EM1028 | 37kDa | |
| Vinculin | ES3700 | 123kDa | |
| Cyclophilin B | EM1219 | 21kDa | |
| 核膜蛋白 | Lamin B | EM1035 | 68kDa |
| 核蛋白 | PCNA | EM1030 | 29kDa |
| TATA binding protein TBP/TBP | EM1216 | 38kDa | |
| YY1 | ES11233 | 45kDa | |
| HDAC1 | ES4225 | 55kDa | |
| Histone H3 | EM1037 | 15kDa | |
| 膜蛋白 | ATPase Na+/ K+ beta 2 (ATPB2) | / | 112kDa |
| 質(zhì)膜 | ATP1A1 (Sodium Potassium ATPase) | ES2892 | 100kDa |
| 線粒體 | COX4 | EM1032 | 15kDa |
| VDAC1 | ES4120 | 31kDa | |
|
全血 血漿 血清 |
Transferrin | EM1231 | 77kDa |
| Albumin | EM1190 | 66kDa | |
| 植物內(nèi)參 | Plant actin | EM1147 | 43kDa |
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